Анализы крови на клещевой энцефалит и боррелиоз

Общие сведения об иммуночипе на боррелиоз

Под иммуночипом понимают диагностическую тест-систему, которая выявляет в сыворотке крови спектр антител к значимым иммунным белкам боррелий классов M (IgM), G(IgG). Это один из методов диагностики боррелиоза, относящихся к категории серологических дифференциальных исследований. Иммуночип состоит из следующих элементов:

• Иммуносорбент в виде слайда из стекла или пластика, покрытого нитроцеллюлозой. На нем раздельно иммобилизованы антигены или синтетические пептиды. Это вспомогательные контроли, представляющие собой антитела к иммуноглобулину IgM или IgG.
• Конъюгат, реактивы. При проведении иммуночипа они помогают определить комплекс антиген-антитело.

Иммуночип на боррелиоз выявляет антитела к антигенам боррелий гариния и афзелия. Их определяют по степени интенсивности сигналов флуоресценции (свечения) в местах локализации определенного антигена на иммуносорбенте. На сегодня иммуночип считается одним из самых точных исследований, подтверждающих болезнь Лайма. Ориентировочная цена анализа составляет около 700 р.

Этиология (причины) болезни Лайма

Возбудитель — грамотрицательная спирохета комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato семейства Spirochaetaceaе рода Borreliae. B. burgdorferi — самая крупная из боррелий: её длина — 10–30 мкм, диаметр — около 0,2–0,25 мкм.

Она способна активно передвигаться с помощью жгутиков. Микробная клетка состоит из протоплазматического цилиндра, который окружён трёхслойной клеточной мембраной, содержащей термостабильный ЛПС со свойствами эндотоксина. Различают три группы антигенов боррелий: поверхностные (OspA, OspB, OspD, OspE и OspF), жгутиковый и цитоплазматический.

Боррелии выращивают на специально созданной жидкой питательной среде, обогащённой аминокислотами, витаминами, альбумином бычьей и кроличьей сыворотки и другими веществами (среда BSK).

На основе методов молекулярной генетики выделено более десяти геномных групп боррелий, относящихся к комплексу Borrelia burgdorferi sensu lato. Для человека патогенны B. burgdorferi sensu stricto, B. garinii и B. afzelii. Разделение возбудителя на геномные группы имеет клиническое значение. Так, В. burgdorferi sensu striсto ассоциируется с преимущественным поражением суставов, B. garinii — c развитием менингорадикулита, В. afzelii — с кожными поражениями.

Боррелии малоустойчивы в окружающей среде: гибнут при высыхании; хорошо сохраняются при низких температурах; при температуре 50 °С гибнут в течение 10 мин; погибают под действием ультрафиолетового облучения.

Основные способы лабораторной диагностики

Возбудителями заболевания выступают боррелии – патогенные организмы из рода спирохет. Инкубационный период длится от 2 дней до месяца (в среднем 3-11 дней), после чего у больных наблюдаются симптомы, напоминающие грипп или ОРВИ, в сочетании с кожными проявлениями – кольцевидной эритремой.

Болезнь Лайма можно определить сразу после попадания возбудителей в организм, если из тела пострадавшего удалось извлечь неповрежденного клеща и доставить насекомое в лабораторию для обследования методом ПЦР (полимеразная цепная реакция). Если в ДНК паразита обнаруживаются боррелии, больному проводится профилактическое лечение антибактериальными препаратами.

При появлении симптомов болезни Лайма на любой стадии для уточнения диагноза назначается ряд исследований:

• ИФА (иммуноферментный анализ);
• хемилюминисцентный иммуноанализ;
• иммуночип;
• вестерн-блот (иммуноблот);
• ПЦР спинномозговой или суставной жидкости.

Если болезнь перешла на вторую или третью стадию, больным дополнительно назначается общий анализ крови для выявления воспалительных процессов в организме и инструментальные методы исследования (УЗИ, рентген, КТ и МРТ), которые позволяют оценить состояние внутренних органов и выявить возможные поражения.

Материалы и методы

Исследованные группы пациентов.

Исследование проведено на базе ООО МО «Новая больница» Екатеринбурга в эпидемический сезон (июнь—июль) 2010, 2011, 2015 и 2016 гг. Критерием включения в исследование служило подозрение на клещевую инфекцию. Применяли как стандартные диагностические методы (определение антител — АТ — IgM и IgG к боррелиям и вирусу клещевого энцефалита — КЭ), так и оригинальные методики специфических полимеразных цепных реакций (ПЦР), выявляющих ДНК
B
.
miyamotoi
или
B
.
burgdorferi s
.
l.,
описанные в деталях ранее [1, 2]. ИКБ-БМ диагностировали на основании выявления ДНК
B
.
miyamotoi
в крови больного в отсутствие лабораторных признаков иных инфекций. Всего выявлено 117 случаев ИКБ-БМ; 10 случаев предположительной микст-инфекции
B
.
miyamotoi
и вируса КЭ в данной работе не рассматриваются. При этом 53 случая ИКБ-БМ в 2015—2016 гг. дополнительно подтверждены путем выявления специфических АТ (см. ниже). Диагноз Л.Б. устанавливали на основании типичной мигрирующей эритемы (МЭ) размером более 5 см, что допускается отечественными и международными стандартами диагностики [16, 17]. В группу сравнения (больные с ЛБ, моноинфекцией
B
.
burgdorferi s
.
l
.) случайным образом отобран 71 пациент. При этом у 15 из них диагноз ЛБ подтвержден методом ПЦР, а у 52 выявлены АТ к боррелиям с помощью зарегистрированной коммерческой тест-системы («Euroimmun», Германия).

Сравниваемые группы сопоставимы по полу и возрасту. Доля мужчин среди больных ИКБ-БМ (59%) статистически незначимо выше, чем у больных ЛБ (45%; p

=0,072; критерий Фишера). Средний возраст (медиана) у пациентов с ЛБ (60 лет) выше, чем у больных ИКБ-БМ (57 лет;
p
=0,051; критерий Манна—Уитни). В целом возраст пациентов находился в диапазоне от 15 до 88 лет.

Методы выявления специфических АТ к
B. miyamotoi.
У видов группы
B. burgdorferi sl.
и
B. miyamotoi
есть несколько общих мембранных белков-антигенов, в результате чего зарегистрированные тест-системы не способны дифференцировать иммунный ответ на эти инфекции. Однако фермент GlpQ не синтезируется
B. burgdorferi s.l.,
но встречается у
B. miyamotoi
. Недавно показано, что
B. miyamotoi
способна экспрессировать также ряд высокоиммуногенных вариабельных поверхностных белков (variable major proteins— VMPs), в частности белки Vlp15/16, Vlp18, Vsp1 и Vlp5 [18]. Разработанный в ЦНИИ эпидемиологии планарный белковый биочип включает белки-антигены как
B. burgdorferi s.l.
(
B. afzelii
— p100, VlsE, p39, p41, p58, BBK32, OspC, p17;
B. garinii
— p100, VlsE, p41, BBK32, OspC, p17), так и
B. miyamotoi
(GlpQ, Vlp15/16, Vlp18, Vsp1, Vlp5), для которых получены генно-инженерные конструкции, кодирующие антигенную область, фрагмент белка или полную последовательность белка. Антигены экспрессированы в
Escherichiacoli
и очищены методами аффинной и ионообменной хроматографии. Иммуночипы изготовляли на слайдах с альдегидным покрытием 3D-Aldehyde Glass Slides («PolyAn», Германия) с помощью плоттера для бесконтактной пьезопечати S3 («Scienion AG», Германия). Учет результатов анализа после нанесения на иммуночип сыворотки крови больных и вторичных АТ к иммуноглобулинам человека проводили с помощью многоканального флюоресцентного сканера MarS («Ditabis», Германия), а подсчет, стандартизацию и интерпретацию результатов — с использованием специально разработанного программного обеспечения StarSky. Уровень специфических АТ IgM и IgG характеризовали полуколичественным способом по величине стандартизованного оптического сигнала (СОС). На основании исследования сывороток здоровых доноров и больных с иными заболеваниями СОС больше 5 условных единиц (усл. ед.) считали превышающей пороговый уровень, который свидетельствует о наличии исследуемых АТ в образце [19].

Количественная ПЦР.

Бактериальную нагрузку в крови больных ИКБ-БМ измеряли в копиях в 1 мл с помощью количественных ПЦР в реальном времени, амплифицирующих 16S РНК или ДНК гена
16S
РНК, с использованием калибровочных кривых с раститровкой соответствующих мишеней от 107 до 103 копий на 1 мл [1, 2].

Статистические методы.

Эпидемиологические и клинико-лабораторные данные сохраняли в базе данных, имеющей более 100 полей на каждую запись (пациента). Все статистические расчеты и оценки проведены с помощью лицензионной программы IBM SPSS Statistics 19 [20]. Для оценки значимости различий распределений количественных и качественных переменных в группах использовали стандартные непараметрические методы [21]. Результаты представлены в виде медианы и межквартильных интервалов (в скобках).

Правила подготовки к исследованию

Антитела IgM к боррелиозу появляются первыми, но примерно на 2-3 неделе с начала болезни. Иммуноглобулины IgG в крови будут наблюдаться еще чуть позже. Она могут появиться как через несколько недель, так и через несколько месяцев. По этой причине, если иммуночип показал отрицательный результат, требуется перепроверка спустя 2-4 недели. Подготовка к анализу на боррелиоз заключается в следующем:

• Избегание физических и стрессовых нагрузок.
• Отказ от жирной пищи, алкоголя за 72 ч до исследования.
• Перед исследованием нельзя курить.
• Последний раз принимать пищу за 12 ч до проведения исследования.
• За несколько дней до анализа по согласованию с врачом необходимо отменить прием лекарств.

Когда сдавать анализ на боррелиоз

Боррелиоз (или болезнь Лайма – она получила такое название в честь места, в котором ее впервые диагностировали в 1975 году) – системная патология, вызываемая бактерией Borrelia Burgdorferi из семейства спирохет. Ее носителями бывают многие животные: собаки, коровы, лошади, овцы, птицы. Но человеку она обычно передается при укусе иксодового клеща (он же является переносчиком энцефалита). Боррелиоз имеет три стадии развития:

• Лихорадка, сильное покраснение кожи из-за расширения капилляров (кольцевидная эритема) – начинается примерно через неделю после заражения.
• Нарушение сердечной деятельности, невропатии, параличи мышц лица – через месяц после заражения.
• Поражения суставов – эта стадия может наступить как через несколько месяцев, так и несколько лет после заражения.

Важно. На ранних стадиях боррелиоз успешно лечится антибиотиками. Если же болезнь запустить, она может перетечь в хроническую форму

Поэтому необходимо диагностировать патологию как можно раньше

Если же болезнь запустить, она может перетечь в хроническую форму. Поэтому необходимо диагностировать патологию как можно раньше.

Сдать анализ на боррелиоз следует после укуса клеща. Далеко не все клещи являются “заразными” (только иксодовые), но определить, является ли насекомое носителем бактерии, визуально нельзя. Поэтому «укушенному» пациенту следует обратиться к врачу как можно скорее. Если вы самостоятельно вытащили клеща из тела, его следует поместить в баночку с крышкой и взять с собой к доктору для анализа. Либо доверить процедуру избавления от паразита непосредственно врачу.

При доставке паразита в медучреждение следует придерживаться следующих правил:

• Для анализа годится и живой, и мертвый клещ;
• Если немедленно доставить живого клеща в клинику нет возможности, его хранят в закрытой банке в холодильнике;
• В емкость с мертвым клещом помещают мокрый ватный тампон – это позволит максимально сохранить вирус;
• Доставить вредителя для анализа необходимо не позднее 2 суток – далее результат исследования может оказаться недостоверным.

Также пациенту следует сдать анализ на боррелиоз

Важно учитывать, что инкубационный период заболевания – около 14 дней. Поэтому результаты исследования, проведенные ранее этого срока, будут недостоверными. Важно

Для первичной диагностики боррелиоза обычно необходима венозная кровь

Важно. Для первичной диагностики боррелиоза обычно необходима венозная кровь. Подготовка к исследованию несложная

Кровь сдают натощак. Курить можно не позднее 30-60 минут до процедуры. Накануне исследования исключается алкоголь

Подготовка к исследованию несложная. Кровь сдают натощак. Курить можно не позднее 30-60 минут до процедуры. Накануне исследования исключается алкоголь.

Обязательно сдать анализ на клещевой боррелиоз следует, когда после укуса клеща наблюдаются следующие симптомы:

• кольцевидное покраснение в области укуса с четкими краями, которое концентрически расширяется с каждым днем;
• лихорадочное состояние, повышение температуры (как при начале гриппа);
• тошнота;
• слабость;
• боль в горле;
• суставные и мышечные боли;
• шелушение и пигментация кожи;
• увеличение лимфоузлов;
• головные боли;
• светобоязнь;
• раздражительность;
• бессонница;
• расстройства концентрации внимания и памяти;
• нарушения координации;
• конъюктивит;
• крапивница.

Анализ на боррелиоз может быть:

• прямым;
• косвенным.

Прямой анализ подразумевает выявление непосредственно самих боррелий. Так как они обитают лишь в некоторых тканях организма, забор материала сопряжен с некоторыми трудностями. Поэтому для первичной диагностики чаще используют косвенные методы (серологические), позволяющие выявить в крови пациента антитела к боррелиозу. Наиболее распространенными являются анализы на антитела lgM и lgG.

Антитела класса lgM обнаруживаются в крови пациента через 2-4 недели после предполагаемого заражения и присутствуют в ней на протяжении нескольких месяцев. Поэтому этот анализ подходит для выявления недавно развившегося боррелиоза.

Антитела класса lgG появляются в крови через 4-6 месяцев и способны сохраняться в ней в течение нескольких лет. Анализ на эти антитела позволяет выявить давно развившееся или уже перенесенное заболевание.

Прямое исследование (обычно это анализ методом ПЦР – полимеразной цепной реакции) проводится в том случае, если серологическая процедура дала отрицательный результат, но у пациента наблюдаются симптомы заболевания. В качестве изучаемого материала выступает спинномозговая жидкость пациента. Также ПЦР-анализу подвергают доставленного пациентом в медучреждение клеща.

Как определить болезнь Лайма у человека

Лабораторные анализы – наиболее информативный способ выявления возбудителей болезни Лайма в организме еще до развития тяжелых симптомов и осложнений.

Чаще всего для диагностики используются так называемые серологические методы диагностики, которые позволяют определить в организме антитела (иммуноглобулина), вырабатывающиеся иммунной системой после попадания возбудителя в кровоток.

Предлагаем ознакомиться: Боррелиоз: лечение разных форм, где лечится, виды профилактики

Существует несколько разновидностей антител к боррелиозу, каждая из которых вырабатывается на определенном этапе заболевания:

• повышенная концентрация (титр) иммуноглобулинов IgM свидетельствует об остром течении инфекционного процесса, так как они вырабатываются на 2-4 неделе после инфицирования;
• иммуноглобулины IgG наблюдаются на второй-третьей стадии болезни, а длительное присутствие антител к боррелиям этого класса в крови свидетельствует о переходе патологического процесса в хроническое течение.

Анализ сдают через 2 недели после контакта с паразитом, после чего повторяют спустя 20-30 дней, так как на ранних стадиях антитела к боррелиям вырабатываются не у всех пациентов.

Если провести серологическое исследование по какой-либо причине невозможно, для диагностики используются микробиологические методы диагностики, чаще всего ПЦР. Они дают менее точную картину, так как выделить возбудителя из крови и других образцов с помощью такого исследования сложнее.

Если для проведения исследования используется венозная кровь, ее берут в амбулаторных условиях, после чего больной может отправляться по своим делам. Забор спинномозговой и суставной жидкости представляет собой сложную, иногда болезненную процедуру, поэтому для проведения исследования требуется госпитализация.

Чтобы результат анализа был максимально точным, перед процедурой нужно подготовиться придерживаться следующих правил:

• избегать стрессовых ситуаций и чрезмерной физической активности;
• не употреблять жирные и острые продуктыу, а также алкогольные напитки за 72 часа до забора крови;
• за несколько часов до исследования не курить;
• последний прием пищи должен быть не ранее чем за 8-10 часов до сдачи биоматериала.

Кроме того, врачу нужно сообщить обо всех лекарственных препаратах, которые принимает больной, а также об имеющихся заболеваниях.

Сдать анализы для выявления болезни Лайма можно в любой частной клинике, примерная стоимость составляет 600-1000 рублей в зависимости от метода проведения диагностики. В государственных больницах исследование проводится бесплатно, но далеко не все медицинские учреждения имеют необходимую для этого аппаратуру и химические вещества.

Для серологической диагностики методом ИФА используется венозная кровь, которую берут через 2-4 недели после укуса, после чего повторяют через 20-30 дней. Исследование дает достаточно информативную картину заболевания, но иногда требует дополнительных анализов для уточнения диагноза.

Расшифровка анализа крови методом ИФА на боррелиоз

Показатели, или референсные значения в расшифровке результатов анализа крови на болезнь Лайма могут отличаться в зависимости от лаборатории, поэтому для постановки точного диагноза следует обратиться к врачу.

Иммуночип

Технология иммуночип аналогична методу ИФА, и основывается на выявлении в крови больного антител, которые вырабатываются при попадании боррелий в организм. Преимущества методики заключаются в том, что она позволяет получить результат гораздо быстрее, а также имеет не два, а гораздо больше маркеров, поэтому определяет наличие или отсутствие заболевания с большей точностью.

Предлагаем ознакомиться: Клещевой боррелиоз или болезнь Лайма

Помимо серологических исследований, при подозрении на боррелиоз используются бактериологические (культуральные) методы, которые подразумевают выделение возбудителя на питательных средах.

Их ценность при постановке диагноза достаточно низкая, так как боррелии очень требовательны к условиям проведения анализа, а вероятность получения ложного результата возрастает.

Расшифровка результатов таких исследований проста – в зависимости от наличия или отсутствия возбудителей заболевания в биоматериале анализ может быть положительным или отрицательным.

На второй и третьей стадии заболевания больным назначается общий анализ крови, который позволяет выявить воспалительные и инфекционные процессы в организме – характерными маркерами при боррелиозе выступают увеличение СОЭ и повышение концентрации лейкоцитов.

Особое значение анализы крови приобретают при диагностике боррелиоза Миямото, который протекает без кольцевидной эритремы, специфического симптома болезни Лайма, из-за чего выявить его гораздо сложнее. В этом случае больным требуется комплексная диагностика, которая включает разные методы исследования и тщательное наблюдение за состоянием здоровья.

Методика ПЦР основывается на выявлении фрагментов ДНК боррелий в биологических жидкостях больного (крови, спинномозговой жидкости) и тканях с пораженного участка. Анализ имеет ряд преимуществ, включая доступность, высокую точность результатов и скорость их получения – максимальный срок составляет 72 часа.

Кроме того, с помощью анализа ПЦР можно выявить не только боррелии, но и другие опасные для здоровья патогенные микроорганизмы. Расшифровка исследования после укуса клещем выглядит следующим образом: положительный или отрицательный результат в зависимости от наличия ДНК боррелий в образцах.

Иммуноблот и вестернблот относятся к наиболее информативным и современным методикам исследования, которые подразумевают выявление в биоматериале больного специфичных белковых соединений.

Они позволяют выявить при диагностике антитела к 10 антигенам патогенных микроорганизмов, определить ее стадию и хроническое течение. Анализ делают через 2-4 недели после укуса, после чего повторяют через месяц для уточнения диагноза и оценки динамики показателей.

Чаще всего вестернблот и иммуноблот используются для диагностики клещевого боррелиоза в комплексе с серологическими методами исследования.

Недостаток этих методик заключается в том, что они достаточно часто дают ложноотрицательный результат, то есть показывают отсутствие заболевания у зараженных людей, что может привести к неправильной постановке диагноза и отсутствию адекватного лечения. Чаще всего такое явление наблюдается у людей с иммунодефицитными состояниями – их организм неспособен дать адекватный ответ на присутствие возбудителя, из-за чего специфические иммунные комплексы в крови отсутствуют.

Если клеща удалось извлечь из тела пострадавшего человека целиком, его доставляют в лабораторию для обследования на наличие возбудителей боррелиоза. Для этого используется метод ПЦР, который позволяет выявить генетический материал боррелий в ДНК паразита. Инфицирование клеща не свидетельствует на 100% о том, что укушенный человек был заражен заболеванием, но для предотвращения неприятных последствий его помещают под строгий медицинский контроль и проводят профилактическое лечение антибактериальными препаратами.

Предлагаем ознакомиться: Клещевой боррелиоз код мкб

Результаты

Из анамнеза 116 из 117 больных ИКБ-БМ и 68 больных ЛБ из 71 достоверно известно, что заболевание возникло после присасывания иксодового клеща. Удалили клеща в день присасывания (65%) 75 больных ИКБ-БМ и 36 (52%) больных ЛБ (р

=0,007). Инкубационный период был несколько длиннее для ИКБ-БМ, чем для ЛБ: 14 (11—17) дней у ИКБ-БМ и 12 (8—19 дней) у ЛБ (
р
=0,02). Начало ИКБ-БМ было острым и больные госпитализировались в среднем на следующий день (от 1 до 2 дня) после появления клинических симптомов, больные ЛБ — на 4-й день (от 2 до 13 дней;
р
=10–14). Лечение в стационаре ИКБ-БМ более длительное, чем лечение ЛБ: 13 (11—15) и 10 (10—11) дней соответственно (
р
=10–14). Для ИКБ-БМ типичны клинические проявления лихорадочного синдрома, редко встречающиеся у больных ЛБ (табл. 1);

Таблица 1.Частота выявления клинических симптомов у обследованных больных ИКБ Примечание. Данные представлены в виде медианы (межквартильный интервал), * — в расчете на одного больного, из 22 регистрируемых симптомов, наличие МЭ не учитывается. у 37% больных ИКБ-БМ определяются более 4 соответствующих симптомов заболевания. МЭ при ИКБ-БМ практически отсутствует, поэтому ранее это заболевание клинически классифицировалось как ИКБ в безэритемной форме. Наличие в 5% случаев МЭ при ИКБ-БМ, вероятно, свидетельствует о микст-инфекции B. miyamotoi
и
B. burg-dorferi s.l.
Напротив, лишь у одного больного ИКБ в безэритемной форме в крови обнаружена ДНК
B. burgdorferi s.l.,
что стало основанием поставить диагноз ЛБ в генерализованной форме.

Основные количественные лабораторные показатели, отличающие ИКБ-БМ от ЛБ, приведены в табл. 2.

Таблица 2. Данные лабораторного обследования больных в разгаре ИКБ Примечание. * — указана доля больных, у которых значение показателя было выше (или ниже) приведенной границы; ** — определение и правила подсчета КПТ приведены в тексте. Прочие общеклинические и биохимические показатели крови и мочи не выходили за пределы физиологической нормы или статистически значимо не различались в обследуемой группе и группе сравнения, и в таблице не приводятся. СКФ — скорость клубочковой фильтрации; АлАТ — аланинаминотрансфераза; СРБ — С-реактивный белок; КПТ — комплексный показатель тяжести. В сравнительном аспекте можно выделить несколько типов симптомов. Во-первых, непосредственные проявления лихорадки и генерализованной воспалительной реакции — высокая температура тела, повышенная ЧСС, высокий уровень СРБ, появление палочкоядерных нейтрофилов в периферической крови, отчасти протеинурия. Во-вторых, лейкопения (за счет лимфопении в отсутствие нейтрофильного плеоцитоза) и собственно лимфопения, гранулоцитопения и тромбоцитопения, что, вероятно, указывает на активацию и «потребление» данных клеток крови при инфекции
B. miyamotoi
. В-третьих, начальные признаки нарушения функций почек — повышение концентрации креатинина и, как более точный показатель, снижение СКФ (CKD-EPI) по креатинину, рассчитываемой с корректировкой на пол и возраст больных. В-четвертых, повышение почти у 50% больных ИКБ-БМ концентрации печеночных ферментов в крови, в первую очередь АлАт. Следует отметить, что нарушения по этим группам показателей, по-видимому, независимы и не коррелируют друг с другом или с выраженностью клинических проявлений заболевания. За исключением очевидных связей (доля и количество клеток и т. п.) статистически значимые, хотя и слабые корреляции отмечены только для температуры тела и уровня СРБ (коэффициент корреляции Спирмена — ККС=0,32), СРБ и уровня белка в моче (ККС=0,47), количества тромбоцитов и лимфоцитов (ККС=0,24;
р
<0,05).

Поскольку патологические проявления не дублируют, но дополняют друг друга, их совместное воздействие можно отразить на некоторой шкале комплексного показателя тяжести (КПТ) боррелиоза. Для построения шкалы использованы следующие 13 показателей: температура тела, ЧСС, количество лейкоцитов, количество нейтрофилов, доля палочкоядерных нейтрофилов, количество лимфоцитов, количество тромбоцитов, уровень креатинина в крови, СКФ, уровень АлАт, концентрация СРБ, протеинурия (см. табл. 2) и «суммарное число симптомов заболевания» (см. табл. 1). Если значения показателя у конкретного больного выходили за референтные, указанные в табл. 1, 2, в патологическую область, то его вклад в КПТ оценивали в 1. (исключение составляла температура тела, считавшаяся высокой, вклад — 1 при значениях выше 39,2 °С).

Средний КПТ при ИКБ-БМ (5,7±1,9) в 5 раз превышал КПТ при ЛБ (1,1±1,1). Боррелиозом с повышенной тяжестью течения далее будет считаться заболевание с КПТ 5 или выше: к нему отнесено 71% случаев ИКБ-БМ и 1 из 71 случая ЛБ (см. табл. 2).

Концентрация ДНК и РНК B. miyamotoi

измерена по гену
16S
РНК в крови 19 больных ИКБ-БМ при поступлении в стационар и в динамике в течение 5 дней. Как показатель уровня бактериемии далее будет использована только концентрация ДНК/РНК при поступлении, поскольку в ходе лечения она резко падает и на 3—4-й день в стационаре определяется только у 2 больных, а на 5-й день не выявляется. Среднюю величину и диапазон концентраций правильнее анализировать и представлять в логарифмических единицах, поскольку распределение концентраций сильно скошенное (не гауссовское), а распределение Log10[кон, колоколообразное. Медиана Log10[ДНК] при поступлении равна 4,0 (3,4—4,3), т. е. концентрация ДНК равна 10 000 копий/ мл; медиана Log10[РНК] при поступлении равна 4,3 (3,3—4,8). Размах уровня РНК
B. miyamotoi
в крови от 0 до 420 000 копий/мл. Количество РНК коррелирует с количеством ДНК (ККС=0,83), но в среднем в 2,5 раза превышает количество ДНК. Это указывает на то, что перед взятием образца в момент поступления больного происходило размножение боррелий, хотя и не слишком активное.

Концентрация ДНК (и РНК) B. miyamotoi

в крови обратно коррелирует с инкубационным периодом (ККС=–0,55) и длительностью промежутка времени между началом заболевания и госпитализацией (ККС=–0,40), т. е. спирохетемия максимальна, когда заболевание развивается сравнительно быстро (рис. 1, а).

Рис. 1. Связь бактериальной нагрузки в крови с эпидемиологическими и лабораторными показателями при ИКБ-БМ. Концентрация ДНК B. miyamotoi в крови в разгаре ИКБ-БМ выражена в копиях генома на 1 мл и представлена на графиках по логарифмической шкале, как Log10[концентрация ДНК]. а — совмещены два графика — зависимость Log10[концентрация ДНК] от инкубационного периода заболевания (кружки) и интервала между появлением симптомов до госпитализации (квадраты); отдельные точки соответствуют значениям, зарегистрированным для каждого из 19 изученных больных; сплошные линии представляют собой аппроксимацию зависимости между переменными по осям X и Y, выполненную методом наименьших квадрантов с локальным взвешиванием по функции ядра Епанечникова. Горизонтальные штриховые линии (б—з) соответствуют границе между «нормальными» (референтными) и «патологическими» значениями показателей, отложенных по оси Y. Концентрация ДНК B. miyamotoi
коррелирует с температурой тела в стационаре (ККС=0,34), ЧСС при поступлении (ККС=0,60) и суммарным числом клинических симптомов заболевания (ККС=0,48), т. е. с непосредственными проявлениями лихорадочного синдрома (см. рис. 1, б—г). Неожиданным оказалось, что при высокой концентрации ДНК
B. miyamotoi
слабее выражены тромбоцитопения (ККС=0,51) и нейтропения (ККС=0,51), ниже уровень креатинина в крови (ККС=–0,38) и белка в моче (ККС=–0,43) (см. рис. 1, д—з). Вероятно, эти наблюдения объясняются тем, что на пике спирохетемии данные нарушения еще не успевают проявиться, а в процессе взаимодействия иммунной системы с патогеном не только падает концентрация боррелий в крови, но и снижается количество эффекторов-клеток крови, а также развивается органная патология. В силу разнонаправленности связей уровня спирохетемии с патологическими проявлениями ИКБ-БМ корреляций концентрации ДНК или РНК
B. miyamotoi
с КПТ не обнаружено.

Концентрация специфических IgM и IgG измерялась дважды: при поступлении больного ИКБ-БМ (в среднем на 2-й день заболевания) и при выписке (в среднем на 14-й день заболевания). Хотя с помощью иммуночипа оценен иммунный ответ на широкий спектр антигенов (см. раздел «Материалы и методы»), из которых наибольший интерес вызывают АТ к основным вариабельным поверхностным белкам (VMPs) различных семейств (Vlp15/16, Vlp18, Vsp1 и Vlp5), в данной публикации для простоты ответ на VMPs будет характеризоваться наибольшим ответом на 1 из 4 VMPs. Кроме того, будет рассмотрен ответ на GlpQ, специфический фермент боррелий — возбудителей КВЛ.

При поступлении только 4 из 32 обследованных больных ИКБ-БМ имели АТ IgM к GlpQ и всего 1 больной — IgG (и IgM) АТ (рис. 2).

Рис. 2. Концентрация специфических IgM и IgG АТ против GlpQ и VMPs в крови больных ИКБ-БМ при госпитализации (а, б) и выписке из стационара (в, г). Концентрация АТ IgM и IgG против GlpQ и VMPs измерена с помощью иммуночипа и выражена в условных единицах по величине СОС. Горизонтальные и вертикальные штриховые линии соответствуют порогам между значениями СОС, указывающими на достоверное наличие АТ, и значениями СОС в отсутствие или при низком уровне А.Т. Отдельные точки соответствуют значениям, зарегистрированным для каждого из 32 изученных больных: 21 больного с более тяжелым течением ИКБ-БМ (белые кружки) и 11 больных с менее тяжелым течением (черные кружки) На рис. а, г и особенно б многие точки лежат в области, соответствующей отсутствию АТ (левый нижний квадрант) и отчасти перекрывают друг друга. Стрелками указаны данные больных, поступивших на 29-й и 44-й дни после присасывания клеща, вероятно, во время рецидива ИКБ-БМ. Примечательно, что этот больной госпитализирован через 29 дней после присасывания клеща, а за 18 дней до этого в анамнезе у него имелось серьезное недомогание, вероятно, спровоцированное первым эпизодом ИКБ-БМ, но диагностированное как соматическое заболевание. Иммунный ответ на поверхностные антигены VMPs развивается раньше, при поступлении уровень АТ IgM и IgG к VMP превышал пороговый у 10 и 4 больных соответственно. При выписке 26 и 28 больных имели АТ IgM соответственно к GlpQ и VMPs. Только у 1 больного из 32 отсутствовали АТ IgM как к GlpQ, так и к VMPs. АТ IgG к VMPs и GlpQ вырабатываются у 19 и 14 больных соответственно (см. рис. 2); у 11 (34%) больных еще не обнаруживались специфические АТ. (По нашим данным, максимальный уровень АТ IgG к
B. miyamotoi
достигается через 30—90 дней после заболевания ИКБ-БМ.)

При выписке уровень специфических АТ варьировал в широких пределах: от 5 усл. ед. (пороговое значение) до 50 усл.ед. по величине СОС. Статистически значимых корреляций уровня АТ с индивидуальными особенностями острой фазы заболевания, в том числе с показателями, перечисленными в табл. 1, 2, и концентрацией ДНК и РНК B. miyamotoi

при поступлении, не выявлено. При этом у 21 (66%) из 32 пациентов наблюдалось повышенная тяжесть течения ИКБ-БМ. В этой подгруппе больных (см. рис. 2, в, г, белые кружки) уровень IgM к VMPs и GlpQ ниже, чем в подгруппе 11 лиц с менее тяжелым течением (
p
=0,005 и
р
=0,05 по критерию Манна—Уитни соответственно). Уровни специфических IgG при выписке в этих подгруппах не различаются.

Ложноположительный результат

Вероятность получения ложноположительного результата составляет 5-10% даже при использовании современных диагностических методик. В таких случаях анализы показывают наличие патогенных микроорганизмов у людей, которые не были заражены боррелиями.

Обычно ложноположительные результаты наблюдаются при наличии у больного других инфекций, вызванных деятельностью спирохет (например, сифилиса), но иногда их причина остается невыясненной.

Преимущества метода

Иммуночип для определения боррелиоза имеет несколько преимуществ перед другими, в том числе серологическими исследованиями на данное заболевание. К основным плюсам относятся:

• возможность определить широкий спектр антител классов G (IgG), M (IgM) к различным видам бактерий, вызывающих боррелиоз;
• точность определения количества антител;
• возможность оценить не только качественный состав антител, но и их количество по коэффициенту позитивности;
• возможность выявить давность заражения боррелиозом;
• высокая чувствительность;
• простота в исполнении;
• автоматизированная интерпретация результатов, что исключает субъективность оценки;
• для проведения анализа берется небольшое количество исследуемого материала.

Лечение

Основу лечения клещевого боррелиоза составляют антибиотики – препараты ряда пенициллинов, цефалоспоринов, макролидов, а также средства широкого спектра действия.

В комплексе с антибактериальной терапией используется симптоматическая, которая позволяет уменьшить проявления заболевания и облегчить состояние больного – нестероидные противовоспалительные средства, антигистаминные и жаропонижающие препараты, иммуномодуляторы, витаминные комплексы. Схема и особенности лечения определяются врачом в зависимости от клинического течения заболевания и других факторов.

Лечение болезни Лайма

Режим. Диета

Режим активности больного определяется тяжестью течения заболевания:

палатный режим — при лёгком, среднетяжёлом течении болезни; постельный режим — при тяжёлом течении, миокардите, нарушениях ритма сердца, менингоэнцефалите, полиартрите.

Специальной диеты для больных не требуется (стол № 15).

Медикаментозное лечение болезни Лайма

Основу лечения составляют антибактериальные препараты, дозы и длительность приёма которых определяются стадией и формой болезни (табл. 17-44).

Своевременно начатое лечение способствует быстрому выздоровлению и предупреждает хронизацию процесса.

Таблица 17-44. Схемы антибиотикотерапии болезни Лайма

В случаях микст-инфекции (лайм-боррелиоз и клещевой энцефалит) наряду с антибиотиками применяют иммуноглобулин против клещевого энцефалита в расчётных дозах.

Дезинтоксикационную терапию проводят по общим принципам. По индивидуальным показаниям применяют сосудистые средства, антиоксиданты.

В период реабилитации проводят гипербарическую оксигенацию, ЛФК, массаж. Санаторно-курортное лечение показано пациентам в стадии ремиссии при хроническом течении с поражением костно-суставной и нервной системы.